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含有緩沖成分的移動相基本上可以通過兩種途徑來配制:
在與有機相組分混合前完成包括pH調節(jié)步驟在內(nèi)的所有緩沖溶液配置過程。
在緩沖溶液和有機相組分混合之后調節(jié)總溶液pH值。
在水溶液體系中pH是一個很好確定的參數(shù),但是在含有部分有機相的溶劑中pH值就沒那么好確定了,或者說質子濃度就不容易測準了。
因此建議在配制緩沖水溶液時,就調好pH值,用規(guī)格為0.4微米的濾膜過濾后再同有機相組分混合。需要注意以下幾點:
pKa值兩側+/-1范圍內(nèi)是zui有效的緩沖區(qū)域,以此為參考選擇正確的緩沖系統(tǒng)。
如果需要將高濃度緩沖液同有機相組分混合,請考慮緩沖溶質沉淀析出的可能性。
在使用前總是選用規(guī)格為4微米的濾膜對緩沖液進行過濾。
注意純水相緩沖液中細菌和真菌滋生的可能性。
在加入有機相組分時,整體溶液pH值通常會產(chǎn)生一些漂移,無機緩沖體系(例如磷酸鹽)的pH值會有所上升,而有機緩沖體系(例如乙酸)pH值則會有所下降。